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    研域干貨:植物安排樣本的前處理

    發(fā)布時間: 2019-10-29  點擊次數(shù): 1413次

    一、勻漿介質(zhì) 

     

    一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測定目標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,意圖是堅持樣本的等滲環(huán)境。 

     

    二、安排勻漿的制備 

     

    1、取安排塊(0.2g~0.5g)可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,濾紙拭干,稱重,放入5ml的勻漿管中。 

     

    2、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例參加4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎安排塊。 

     

    3、勻漿的方式:手藝勻漿,機(jī)器勻漿。 

     

    ① 手藝勻漿:左手持勻漿管將下端刺進(jìn)盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直刺進(jìn)套管中,上下轉(zhuǎn)動研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充沛研碎,制成20%的勻漿液。 

     

    ② 機(jī)器勻漿:用安排搗碎機(jī)10000~15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成20%安排勻漿,也可用內(nèi)切式安排勻漿機(jī)制備(勻漿時刻10秒/次,間隙30秒,接連3~5次,在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延伸勻漿時刻),
     

    4、將制備好的20%勻漿液用一般離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進(jìn)行測定. 

     

    三、樣本保存: 

     

    植物安排樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中心如不重復(fù)凍融,-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。 制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測定,如放置時刻過長相關(guān)酶活會有所下降,部分目標(biāo)4℃可寄存3~5天(如SOD要寄存2~3天,MDA可寄存3~5,總蛋白測定可存5~7天。

     

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