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    人白細胞介素酶聯免疫分析使用說明書

    發(fā)布時間: 2016-05-05  點擊次數: 1050次

    人白細胞介素酶聯免疫分析使用說明書使用目的:
    本試劑盒用于測定人血清、唾液及相關液體樣本中白細胞介素 1β(IL-1β)含量。
    人白細胞介素酶聯免疫分析實驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素 1β(IL-1β)水平。用純化的人
    白細胞介素 1β(IL-1β)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入
    白細胞介素 1β(IL-1β),再與 HRP標記的白細胞介素  1β(IL-1β)抗體結合,形成抗體
    -抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在    HRP酶的催化下轉化
    成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素 1β(IL-1
    β)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人白細胞介素 1β(IL-1β)濃度。

    標本要求

    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
    馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    人白細胞介素酶聯免疫分析使用說明書操作步驟

    3.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。
    4.加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    5.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
    6.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
    7.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復 5次,拍干。
    8.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
    9.溫育:操作同 3。
    10.洗滌:操作同 5。
    12.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
    13.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
    14.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。

    人白細胞介素酶聯免疫分析操作程序總結:
    計算以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的
    OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

    人白細胞介素酶聯免疫分析使用說明書注意事項
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
    用完,板條應裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
    控制在 5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
    4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本  OD值
    大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計
    算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。
    10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6個月
     
     

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